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기생충 및 벡터 16권, 기사 번호: 299(2023) 이 기사 인용

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측정항목 세부정보

바베시아 속의 6종의 apicomplexan 기생충, 즉 B. microti, B. divergens, B. duncani, B. motasi, B. crassa-like 및 B. venatorum은 풍토병에서 인간 바베시아증의 주요 원인 물질로 간주됩니다. 지역. 이들 6종은 일차 숙주에 대해 다양한 정도의 독성을 갖고 있습니다. 따라서 이러한 종의 정확한 식별은 적절한 치료 전략을 채택하는 데 중요합니다.

우리는 5개 Babesia 종의 18S 리보솜 RNA 유전자를 표적으로 하는 실시간 PCR-고분해능 용융(qPCR-HRM) 접근법을 개발했습니다. 용융 온도(Tm) 및 유전자형 신뢰도 백분율 값을 기준으로 합니다. 이 접근법은 진드기에 물린 병력이 있는 환자로부터 수집한 429개의 혈액 샘플, 플라스미드와 혼합된 120개의 DNA 샘플 및 80개의 실험실에 감염된 동물 샘플을 사용하여 평가되었습니다.

제안된 qPCR-HRM 방법의 민감도와 특이도는 각각 95%와 100%였으며, 검출 한계는 클로닝된 표적 유전자를 포함하는 플라스미드의 1~100개 복사본이었다. 검출 수준은 분석된 바베시아 종에 따라 달라졌습니다. 이 연구에서 설계된 프라이머는 우리가 제안한 방법의 높은 종간 특이성뿐만 아니라 전 세계적으로 동일한 종의 다양한 분리물에 대한 높은 다양성을 보장합니다. 또한, 준비된 플라스미드 표준에서 얻은 Tm은 이론적으로 5개 바베시아 종의 모든 알려진 서열의 분리물을 식별하는 데 적합합니다.

개발된 검출 방법은 인간 바베시아증의 역학 조사 및 수혈 전 검사에 유용한 도구를 제공합니다.

바베시과(Order Piroplasmida; Phylum Apicomplexa)에 속하는 혈액 원생동물인 바베시아(Babesia) 종에 의해 발생하는 인간 바베시아증은 다시 나타나는 진드기 매개 질병입니다. 인간의 수혈 전파 및 자연 획득 바베시아 감염 사례는 심각한 공중 보건 문제를 나타내며 최근 전 세계적으로 자주 보고되고 있습니다 [2, 3]. 인간 바베시아증의 원인이 되는 병원체는 주로 진드기 물림과 수혈을 통해 전염되며, 드물게 주산기 경로와 장기 이식을 통해서도 전염됩니다[4,5,6,7,8]. 현재까지 전 세계적으로 100종 이상의 바베시아(Babesia) 종이 확인되었습니다.

바베시아 종. 이전에는 야생동물과 가축에만 감염되는 것으로 여겨졌습니다. 그러나 1957년 유고슬라비아에서 바베시아에 대한 인간 감염 사례가 처음으로 보고되었으며[10], 이 질병은 점차적으로 인간에게 있어서 새로운 세계적인 기생충 질환이 되었으며, 면역 체계가 약한 사람들에게 건강을 위협할 가능성이 있습니다. 6종의 바베시아 종, 즉 B. microti, B. venatorum, B. divergens, B. duncani, B. motasi 및 B. crassa–like는 인간 바베시아증을 담당하는 주요 병원체로 잘 알려져 있습니다[11, 12]. 미국에서 바베시아 사례의 대부분은 이 질병이 풍토병인 지역에서 B. microti에 의해 발생하지만, B. duncani 및 B. divergens도 미국에 분포합니다[13]. 유럽에서는 B. divergens가 주로 프랑스와 아일랜드에서 발견되고[12, 14], B. venatorum은 오스트리아, 독일, 이탈리아, 스웨덴에서 보고되었으며[14,15,16] B. crassa 유사 감염이 보고되었습니다. 슬로베니아와 프랑스에서 [17, 18]. 아시아에서는 B. venatorum과 B. crassa–like가 주로 중국에서 보고됩니다[19, 20]. 그러나 B. microti 사례는 미얀마 국경을 따라 중국 남서부, 대만, 일본에서 보고되었습니다 [21,22,23,24,25]. 바베시아 모타시(Babesia motasi) 균주 KO1(DQ3466955)은 한국에 분포한다[12, 26]. B. motasi KO1 및 Babesia sp.의 서열. 한국의 2명의 인간 사례에서 분리된 KCDC-1(MK930513) 균주는 중국의 B. motasi hebeiensis 균주의 서열과 큰 유사성을 보였습니다[26]. 또한 미국 워싱턴 주에서 처음 보고된 B. duncani가 현재 캐나다에서도 널리 퍼져 있는 것으로 관찰되었습니다 [27,28,29].

2 years [30, 31]. Thus, Babesia-infected patients who are asymptomatic may spread the pathogen to others via blood transfusion or organ transplantation [32]. In the USA, parasitic infections related to blood transfusions are almost entirely caused by Babesia [33]. It has also been observed that transfusion-transmitted babesiosis causes severe complications and death in approximately one of every five cases [30]. However, in human babesiosis-epidemic areas, blood screening for babesiosis is still lacking or only performed at a limited number of blood collection centers [34]./p>

0.25° C are considered to be indicative of different species [47]. The amplicons of B. duncani and B. motasi hebeiensis have the lowest and highest Tm, respectively, with a difference of about 1.7 °C. There was no overlap between the Tm range and melting curve characteristics of the five Babesia species, which could be accurately distinguished by HRM analysis. Considering the practicability of the qPCR-HRM in the diagnosis of babesiosis, the designed primers ensure high interspecific specificity of the method. Additionally, owing to the high homology existing between the different isolates, the Tm obtained from the prepared plasmid standard showed applicability for distinguishing all the known sequences of targeted species. These results lead to the conclusion that this method is highly versatile for different isolates of the same species worldwide. During the melting curve analysis, the GCP of the automatically invoked results was 90–100%, and the GCP provided strong support for the results of species discrimination./p>