정량적 다중 RT 개발

Scientific Reports 13권, 기사 번호: 12073(2023) 이 기사 인용

299 접속

2 알트메트릭

측정항목 세부정보

델타형 간염은 B형 간염(HBV) 및 D형 간염(HDV) 바이러스에 대한 노출로 인해 발생하는 질병으로, 일반적으로 HBV 단일 감염에 비해 임상 결과가 더 심각합니다. 현재까지 HDV 감염의 실제 유병률은 과소평가되어 있으며 특히 발병 지역이 더 많은 지역에서는 검출 방법을 이용할 수 없습니다. 따라서 HDV-RNA 정량화를 위한 1단계 RT-qPCR 방법이 개발되었습니다. 생물학적 샘플은 Centro de Pesquisa em Medicina Tropical de Rondônia 및 Serviço de Assistência Especializada의 Ambulatório Especializado em Hepatites Virais의 환자로부터 2017년부터 2023년 사이에 선택되었으며 이 연구에서 개발된 테스트와 두 번째 정량적 RT-qPCR 분석을 거쳤습니다. 초기 정량적 분석의 기울기는 -3.321이었고 효율은 100.04%이고 증폭 계수는 2였습니다. 반복성 데이터 분석에서 정량 한계는 5개 사본/반응, 검출 한계(95%)는 2.83개 사본으로 나타났습니다. 반응. 진단민감도 테스트에서는 참고검사 대비 97.37%의 정확도를 보였다. 이 분석법은 매우 효율적이고 재현성이 뛰어나 델타 간염 환자를 모니터링하고 질병 진행 위험과 치료 효과를 평가하는 데 유용한 도구임이 입증되었습니다.

델타바이러스 속으로 분류된 델타 간염 바이러스(HDV)는 비정형적이며, 크기가 36~43nm인 음의 극성 RNA의 단일 가닥의 약 1,700개 뉴클레오티드를 나타내며 외부 구조에서는 B형 간염 바이러스(HBV)의 표면 단백질을 나타냅니다. )1,2. HDV 감염은 이전 노출, 현재 또는 동시 HBV 감염이 선행됩니다. 일반적으로 임상 결과는 HBV 단일 감염에 비해 간경변이나 간세포암종으로의 진행이 가속화되는 등 더 심각합니다.

현재 전 세계적으로 HDV의 유병률을 정확하게 추정하는 것은 어렵습니다. 아프리카, 아시아, 아메리카, 동부 지중해 및 유럽 전역에 걸쳐 최소 1,200만~1,500만 명이 이 바이러스에 감염될 수 있습니다6,7. 남아메리카에서 HDV의 풍토병 지역은 북쪽(아마존 분지 지역)에 위치하고 있으며 여러 국가에 걸쳐 있습니다5,8,9,10. 브라질에서는 2000년부터 2021년까지 보고된 사례 수가 4,259건이었습니다. 이 질병은 전국적으로 무시되고 있으며 동시 감염을 결정하기 위해 HBV 단일 감염된 환자에 대한 적극적인 검색이 없기 때문에 이러한 숫자는 과소보고된 것으로 간주될 수 있습니다11.

HDV 감염의 혈청학적 진단은 혈청 내 총 항-HDV 항체의 검출을 기반으로 합니다. 간 조직 내 HDAg의 존재는 간 섬유화 정도를 평가할 수 있는 비침습적이며 통증이 없는 방법인 간 탄성 조영술을 통해 감염을 확인할 수 있는 임상 지표이기도 합니다4,12. 항-HDV 항체가 검출되면 분자 진단을 사용하여 활성 감염을 확인하거나 배제합니다. 분자 테스트는 RT-qPCR 방법으로 정량화된 혈장 내 HDV RNA를 검색하여 수행됩니다. 그러나 브라질 보건 감시국(Anvisa)에 등록된 키트가 없기 때문에 이는 관례적이지 않습니다. 전문 전문가가 내부 테스트를 개발할 수 있는 제한된 영역에서 HDV를 정량화하기 위해 분자 방법을 사용하는 것도 제한 요소입니다13.

따라서 HDV 분자 진단은 아마존 지역의 풍토병 지역에서 널리 이용 가능하지 않기 때문에 여전히 어려운 과제로 남아 있습니다. 이 연구의 목적은 델타 간염 환자의 진단 및 추적 관찰을 위한 고감도 정량적 다중 다중 1단계 RT-qPCR 분석을 개발하는 것이었습니다.

플라스미드는 증폭 효율과 선형성을 결정하기 위해 반응당 1 x 105 및 1.25 복사본(1 x 105, 1 x 104, 1 x 103, 1 x 102, 1 x 101, 5, 2.5 e 1.25) 간격으로 테스트되었습니다. 반응당 5개 복사본을 초과하는 정량 곡선의 모든 지점은 다양한 분석에서 100% 증폭되었습니다. 초기 정량적 테스트의 기울기는 -3.321이었고 효율은 100.04%, 직선의 상관계수(R2)는 0.99, 증폭계수는 2였습니다(그림 1 참조).